抗人IgG單克隆抗體RM 8671是一種在鼠懸浮培養(yǎng)中表達(dá)的重組人源化 IgG1κ，并經(jīng)過生物制藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的上游和下游純化，以去除工藝相關(guān)的雜質(zhì)。它是通過鏈間和鏈內(nèi)二硫鍵連接的兩條輕鏈和兩條重鏈亞基的約 150 kDa 同源二聚體。抗人IgG單克隆抗體RM 8671分子具有高豐度的 N 末端焦谷氨酰胺化、C 末端賴氨酸剪切和重鏈糖基化。該蛋白質(zhì)還具有低豐度的翻譯后修飾，包括蛋氨酸氧化、脫酰胺和糖化 [1-4]。
抗人IgG單克隆抗體RM 8671完整分子量分析
質(zhì)譜電噴霧離子化源( ESI)可以使完整抗體蛋白帶多個(gè)電荷，從而將質(zhì)荷比(m/z)降至質(zhì)譜儀可監(jiān)測的范圍內(nèi)。而對帶多電荷的蛋白質(zhì)譜譜圖進(jìn)行去卷積處理是完整蛋白質(zhì)分子量測定的首選方法，其與高分辨率質(zhì)譜儀一起使用時(shí)，可區(qū)分抗人IgG單克隆抗體糖型與其它翻譯后修飾(PTM)。在進(jìn)入質(zhì)譜儀之前，色譜分離可用于提高基于MS的完整檢測的通量和靈敏度。反相高效液相色譜(RP - HPLC)和尺寸排阻色譜(SEC)都已成功用于完整的mAb分離檢測[;]。本研究將上述方法應(yīng)用于抗體對照品的分析中，并將實(shí)測的分子量與理論分子量進(jìn)行比較。
mAb的完整分子量解析如表1及圖1所示。圖1A顯示，抗人IgG單克隆抗體完整蛋白所帶電荷狀態(tài)良好。綜合表1和圖1B可知，mAb的主峰(4號峰)是重鏈上攜帶的兩個(gè)COF;部分重鏈(5號峰)含有COF/G1F,相對比例為18.3%;小部分抗體兩條重鏈(6號峰)攜帶GIF糖型，其比例為3.1%。相對比例為6.9%的重鏈(2號峰)攜帶COF/COF(COF掉一個(gè)HexNAc)，極少部分(1.4%)重鏈(1號峰)攜帶的COF/COF掉2個(gè)HexNAc。可見此抗體的主要糖型是GOF與GIF。3號峰未解析出，從圖1B插圖可得，其匹配的是主峰的部分，即此峰為主峰的一部分，此現(xiàn)象可能是去卷積ReSpect算法導(dǎo)致的。
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